基因扩增反应在分子生物学和临床诊断等领域是一种非常有价值的重要技术。应用最为广泛的是1993年获得诺贝尔化学奖的聚合酶链式反应（PCR），但是PCR技术需要依赖控温精确的热循环仪器，使得以PCR为基础的基因扩增技术不适用于现场快速检测。基因等温扩增技术由于不需要温度变化操作，摆脱了对热循环仪器的依赖，在临床诊断和现场快速诊断中展示了巨大的应用前景。而现有的基因恒温扩增技术虽然解决了PCR方法依赖的热循环反应，但它们仍需要初始热变性操作来分离核酸双链结构，或多种蛋白酶、特殊反应试剂参与反应，或复杂的引物设计。因此，开发高效的基因扩增机制、操作便捷、灵敏度高、检测成本低的基因等温扩增方法仍然是一个挑战。

  生物反应器工程国家重点实验室叶邦策教授课题组提出了一种基于Cas9切口酶的恒温核酸扩增分析方法（Cas9 nickase-based amplification reaction,Cas9nAR），通过单链切割活性的Cas9切口酶偶联链置换活性的DNA聚合酶，精巧的引物设计，实现了常温条件下特异性扩增微生物、细胞等生物样本中基因组，检测灵敏度达到10微升反应体系1个拷贝数基因组的检测，且具有单碱基区分特异性。该方法具有准确性高、适用性广、操作简便、检测速度快、成本低等优点，在疾病相关基因（单核苷酸多态性）、血液中病原体、细菌病毒等精准快速检测应用展示了巨大的潜力（已申请中国发明专利）。

  该研究工作由博士研究生王婷，刘永等完成，近日以“An RNA-Guided Cas9 Nickase-Based Method for Universal Isothermal DNA Amplification”为题发表在国际著名学术期刊《德国应用化学》，尹斌成副教授和叶邦策教授为文章的共同通讯作者。该研究得到了国家自然科学基金委优秀青年基金项目、重点项目、创新研究群体项目等项目资助。

原文链接：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/anie.201901292

DOI: 10.1002/anie.201901292